标签: 湿热灭菌

一、 什么是灭菌？ 灭菌（sterilization），是杀灭或除去环境中一切致病和非致病微生物的过程。灭菌是获得纯培养的必要条件，也是食品工业和医药领域中必需的技术。灭菌主要涉及到如设备、容器、工作服装、耗材、液体等等的灭菌。经过灭菌处理后，未被污染的物品，称无菌物品。经过灭菌处理后，未被污染的区域，称为无菌区域。以实验室为例，为了保证实验过程的样品免受污染，需要对用到的实验耗材进行高压灭菌。 二、 灭菌的方法 常见的灭菌方法有湿热灭菌法、干热灭菌法、辐射灭菌法、过滤除菌法和化学灭菌法等。 湿热灭菌法：以高温高压水蒸气为介质，借助水蒸气的巨大潜力和极强的穿透力使蛋白质变性或凝固进而造成微生物死亡，是一种在生物实验室和药物制剂生产过程中常用的灭菌方法。 干热灭菌法：在干燥环境下借助高温杀死细菌或芽孢的技术。该法适用于不耐受湿热环境的物品，如干燥粉末、油脂、器械等。干热灭菌法所需温度高，时间较湿热灭菌法更长。干热灭菌法不适用于不耐热材料，如塑料等。 辐射灭菌法：利用电离辐射杀死大多数物质上的微生物的一种有效方法。它们可以通过特定的方式控制微生物生长或者杀死微生物。辐射灭菌法适用于无法耐受高温环境的物品，如在常温或低温下进行食品的灭菌处理，在维持食品质量的同时做到无残留。 过滤除菌法：利用物理阻留的方法将液体或空气的细菌除去，从而达到无菌目的。该方法只适用于液体及气体的除菌，如细胞培养时给细胞装置通气孔连上一个除菌空气滤器以实现除菌。 化学灭菌法：用化学药品直接作用于微生物而将其杀死的方法，可分为气体灭菌法和液体灭菌法。气体灭菌法采用气体灭菌剂进行灭菌，如臭氧、环氧乙烷等；液体灭菌法采用液体灭菌剂进行灭菌。凡是不适用于物理灭菌的物品都可以采用化学灭菌法。 三、 点成NÜVE灭菌器 NÜVE公司成立于1968年，是世界领先的实验室和灭菌设备制造商。NÜVE长期为土耳其乃至全世界100多个国家不同行业的用户提供灭菌领域的高性能产品。2022年1月，NÜVE同点成生物正式建立合作。 目前，点成NÜVE的灭菌器主要通过湿热灭菌法和干热灭菌法满足用户多领域的灭菌需求。灭菌器采用先进的微处理器控制系统，搭配用户友好的彩色LED显示屏，具有完全可追溯性和远程访问功能，兼具过程评估及自我诊断系统，确保用户使用安全。 点成NÜVE蒸汽灭菌器 点成NÜVE灭菌干燥箱 【关于我们】 我们专注于生命科学、温度控制、临床应用、微流控等领域，重点包括水浴、摇床、混匀器、离心机、微流控芯片等产品，致力于生物科技领域产品和解决方案。

湿热灭菌常见术语 （一） D 值 1.D 值：微生物的耐受参数，指在特定温度下使微生物的数量下降一个对数单位或杀灭 90% 所需要的时间。 D 值越大，说明该微生物的耐热性越强。 D 值需注明参照温度，即以 DT 表示，如 D121℃=1.5 分钟，指在 121℃ 条件下，杀灭 90% 的微生物需要 1.5 分钟。 注：自然界存在的微生物 D121℃ 一般小于 0.5 D 值测定方法 ∶1. 阴性分数法 2. 存活曲线法 2. 微生物 D 值举例 ∶ l 嗜热脂肪芽孢杆菌：已知最具热抵抗力的微生物， D121℃ 值在 1.5 分钟到 3 分钟之间 l 葡萄球菌：通常是引起洁净室污染的“祸首"， D121℃ 值大约为 0.25 分钟 l 生孢梭菌：典型的高抵抗性的“正常菌群， D121℃ 值大约为 0.8 分钟 l 假单胞菌：通常存在水中， D121℃ 值大约为 0.17 分钟 3. 嗜热脂肪芽孢杆菌在不同温度，不同介质中的 D 值： l 同一种微生物在同种溶液中，不同温度下 D 值不同 ; l 同一种微生物在同一温度下，不同溶液中 D 值不同。 （二） Z 值 使微生物的 D 值变化一个对数单位所需升高或下降的温度。常用于累计一个灭菌程序在加热和冷却阶段随温度变化的杀灭时间。 （三） 灭菌率（ Lethal Rate , L ） 灭菌率：指某一温度 T(℃) 下灭菌 1 分钟所获取的标准灭菌时间，用 L 表示。 L （ Tref ， z ） =10 （ T-Tref ） /z ； Tref 指标准灭菌温度 F0 ：指 Z 取 10℃ 时，一个湿热灭菌程序赋予被灭菌品 121℃ 下灭菌的等效灭菌时间。 （四）无菌保证水平（无菌保证水平 Sterility Assurance Level, SAL ） 产品 / 物品经灭菌后微生物残存的概率。描述灭菌后非无菌单元概率。无菌保证水平 ≤10-6 ，即灭菌后微生物存活的概率不大于百万分之一。 （五）平衡时间 平衡时间指灭菌腔室（腔室参照温度通常是排水口探头温度）达到最小设定灭菌温度和装载达到最小设定灭菌温度之间的时间间隔，后者由加热最慢的热穿透探头测得。它体现了灭菌柜去除装载中空气并对装载加热的能力。 （六）生物指示剂 (Biological Indication,Bl ) 1 、生物指示剂：对特定灭菌处理有确定的抗力，并装在内层包装中、可供使用的染菌载体。 2 、蒸汽灭菌常用 BI 菌种 - 嗜热脂肪芽孢杆菌，两个重要质量参数：孢子含量和 D 值 （七）灭菌（ Sterilization ） 指用以使一个产品达到规定微生物存活概率的工艺过程。 （八）灭菌程序 ( Sterilization Cycle ) 指使物体成为无菌的一系列运行参数（例如时间、温度、压力 ) 和条件组成的程序。 （九）灭菌原理 1 、灭菌原理： 121℃ 时，水发生相变，产生大量的热。饱和蒸汽在接触到灭菌物体时，发生相变，由饱和蒸汽变成水，产生大量的热，热量将微生物杀死 2 、水在不同温度下的饱和蒸汽压： 121℃ 对应两个大气压， 134/135℃ 对应三个大气压 3 、湿热灭菌的相关法规： EN285 英国、 GB8599 中国、 HTM 美国 —— 蒸汽灭菌柜的要求 （十）灭菌的基本要求 1 、无菌药品应当尽可能采用加热方式进行最终灭菌 2 、 SAL 无菌保证值不得高于 10-6 3 、装载方式通过验证确认 4 、灭菌工艺再验证周期：最长一年 （十一）灭菌合格标准 1 、物理指标：温度时间曲线； F0 值 2 、生物指标（生物指示剂 ) ：降低 6 个 log 值，阳性对照实验 最为常用进行判断的灭菌标准为 F0 值 虹科 Ellab 灭菌验证方法 自 1949 年以来，虹科 Ellab 一直是您的验证合作伙伴，提供医药和生物技术行业优秀的精度和质量的热验证解决方案，包括有线温度系统 E-Val Pro 和无线温度验证系统 TrackSense Pro ，硬件和软件均在丹麦的总部设计和制造。虹科 Ellab 提供验证设备和 IQ/OQ 服务，以及租赁服务和校准服务，我们以专业的客户支持计划，包括技术支持，现场和工厂校准，服务能力等赢得客户的信赖。 ELLAB 服务于大型、中型、小型的制药、医疗和食品行业的企业，并涵盖几乎所有的过程中验证解决方案，包括在灭菌，冷冻干燥，隧道式烘箱，巴氏杀菌，仓库温度分布验证，巴氏灭菌等多种应用。 虹科 ValSuite Pro 验证软件自带灭菌值计算（默认 F0 ） ValSuite Pro 是 ELLAB 著名的验证和校准软件，符合 FDA 21 CFR Part 11 的要求，并确保了数据的完整性，具有审计追踪和权级分配的功能。 ValSuite 的功能包括具有明确通过 / 失败标准的自定义报告、 测试模板、数据分析、监控、实时数据等。 ValSuite 支持多种语言版本，包括中文，可以在 Windows 7 、 8 和 10 32/64 位系统下运行。其强大的数据分析工具，减少了定位关键数据的时间，提供验证的工作效率。 虹科 ELLAB 的温度验证软件 ValSuite 自带灭菌值计算功能，默认自动计算 F0 。以下是计算公式： Δ t—— 测量被灭菌物料温度的时间间隔，通常为 0.5~1min T 是每个时间间隔所测得的灭菌物料的温度 Tb 参比温度（通常为 121℃ ） Ps ： 1. 在 ValSuite™ 软件中，致命性提升的限制是 50.000 。 2.D 值 — 灭菌值计算的减少因子默认为 1 。如果 D 值为 2 ，灭菌值计算将除以 2 ，依此类推 3.F0 （湿热灭菌）一般灭菌方法，例如高压釜 （（灭菌值公式）按分钟计算） 默认值： l 参考温度： 121.11℃ 。 l 最小致死温度： 91.11℃ 。 l Z 值： 10.00 。 2. 操作步骤： （ 1 ）添加灭菌值 （ 2 ）灭菌值计算