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一、概述 细胞尺寸在生物研究中至关重要。越来越多研究揭示了细胞大小和表型特征（如干性特征、增殖能力和代谢状态）之间复杂的相关性。在生物制造等应用的工艺流程中，细胞大小是评估细胞治疗中分批培养或原材料细胞是否健康的关键指标。因此，自动细胞计数中可靠的细胞大小测定已成为重要的结果。 点成LUNA-FX7细胞计数仪可精确提供细胞大小的数据。 除了所有点成LUNA系列细胞计数仪共有的标准细胞尺寸门控功能外，点成LUNA-FX7计数输出还包括与每个细胞活力状态结合的尺寸测定。此外，点成LUNA-FX7具有多种方法来根据计数期间和计数后的大小对细胞群进行分析和分类。在此，我们展示了点成LUNA-FX7在 测量细胞尺寸上的准确性和可靠性及其精确的尺寸门控功能 。为了评估确定细胞大小的准确性，在明场总细胞计数模式下对六种不同的NIST可追踪粒度标准品和两种细胞系AsPC-1(胰腺癌)和DLD-1(结肠癌)进行了计数。 二、实验过程 1、 精确测量各种粒径 六种不同的NIST可追踪粒径标准品(10-46 μm)在点成LUNA-FX7的明场总细胞计数模式下进行计数。测定粒径的准确度为96.7%以上。相反，市面上大多细胞计数仪对于10 μm或更小和50 μm及更大的颗粒则不准确。 NIST可追踪粒度标准的尺寸测定。 (A-F)图像显示了标记良好的颗粒，表明颗粒直径尺寸的精确测量。 (G)该表显示了LUNA-FX7™和竞争对手计数器的测量颗粒尺寸和尺寸测量精度。 2、混合条件下目标尺寸颗粒的计数 为了评估点成LUNA-FX7中尺寸测量的精确性，我们准备了四种不同比例的NIST可追踪粒径标准品（~10 μm、20 μm、40 μm和60 μm）的混合物。最初，我们对最小细胞尺寸值为3 μm和最大细胞尺寸值为60 μm的混合颗粒进行计数，该值是根据默认协议进行修改的。计数后，生成细胞浓度与细胞大小的直方图，并且NIST标准已正确分类。 精确的尺寸测定。 (A) 图像显示了标记良好的各种尺寸的颗粒。 (B-C)直方图指示NIST颗粒按尺寸的准确分布。 执行选定的尺寸门控，生成适合目标尺寸的完美标签，尺寸测量的准确度超过96.2%。此外，尺寸门控可以轻松应用于点成LUNA-FX7，通过计数前预设的协议，通过计数后立即调整直方图，或利用具有不同大小参数的协议重新分析存储的计数数据。 LUNA-FX7™中特定尺寸的门控。 标记的图像和直方图显示，目标尺寸的颗粒（以橙色表示）通过门控进行了集中、选择性和排他性的检测。 3、细胞系的计数和尺寸门控应用 最后，我们计数了两种不同大小范围的细胞系：AsPC-1（胰腺癌）和DLD-1（结肠癌）。健康的AsPC-1 细胞的尺寸范围为8 - 40 µm，而健康的DLD-1细胞的尺寸范围预计较窄，为10 - 20 µm。LUNA-FX7™ 准确捕获两个种群的整个大小范围。 AsPC-1和DLD-1细胞的细胞计数和大小测定。 应用AsPC-1 (A-C)和DLD-1 (D-F)细胞系来确认不同尺寸混合的计数性能。 4、结论 点成LUNA-FX7™有多种方法来测量、区分和确定细胞群的大小。点成LUNA-FX7™具有计数期间和计数后预定义大小门控选项，可灵活评估细胞群的健康状况和质量。此外， 点成LUNA-FX7™的再分析功能 可以对下游分析中保存的珍贵计数进行更广泛的评估。 三、点成生物细胞计数解决方案 作为全国知名的实验室仪器集成商，点成生物始终致力于为客户提供先进的实验室设备解决方案。点成Aligned genetics为用户提供了先进的自动细胞计数仪设备，设备具有极高的精确度和可重复度。如果您对点成Aligned genetics自动细胞计数仪设备感兴趣，欢迎随时与我们联系。

来源：点成生物科技 点成案例 | 使用自动细胞计数仪进行酵母细胞计数 原文链接：https://mp.weixin.qq.com/s/ySQNPftdrVO9cyH8mS78vw 欢迎关注虹科，为您提供最新资讯！ 01 概述 酵母可用于基础研究、酿造和蒸馏以及食品生产等多种应用，这些应用的全过程都离不开准确的细胞计数和活力测定。事实证明，较小的尺寸和形态对于自动细胞计数仪来说是相当具有挑战性的，利用活体染色剂手动计数酵母的方法繁琐且容易出错。在这篇文章中，我们分享了如何利用LUNA FX7自动细胞计数仪准确可靠地对酵母细胞进行计数。 02 实验方法 1 将酵母菌株EC1118接种到YPD肉汤中，30℃、200 rpm培养过夜 2，将酵母按照1：3至1：5的比例稀释在1XPBS中 3 稀释的培养物被稀释成2个相等的样品，然后将一份样品热灭活（65℃，20分钟）以生成“活细胞和死细胞”，用于活力测试 4 使用酵母细胞缓冲液Ⅱ按细胞：缓冲液=1：5和1：10的比例进一步稀释细胞 5 活力测试：如表混合活细胞和死细胞 03 实验结果 1 LUNA-FX7自动细胞计数仪计测的细胞活力线性情况 为了确定细胞活力的线性情况，使用活细胞和死细胞制备各种活力的样品，然后使用LUNA-FX7自动细胞计数仪进行计数。使用LUNA-FX7，可以在荧光模式下检查活力，也可以用明场模式的 检查。 为了在明场模式下测定细胞活力，将酵母样品与相同体积的0.02%亚甲蓝染色剂混合，并将10 μl样品加载到LUNA细胞计数载玻片上。酵母样品制备为死细胞(0%)、25%、50%、75%、活细胞(100%)。 使用LUNA-FX7 自动细胞计数仪 明场模式的 测定细胞活力 用亚甲蓝染色并标记的酵母细胞 如图所示，将5个样品用0.02%的亚甲蓝染色并在明场模式的 中进行图像观察与拍摄。重复计数3次，计算平均活力，并据此确认细胞活力的线性情况。在LUNA FX7明场模式 测得的活力R2=0.9964，与理论活力高度吻合。 使用LUNA-FX7 自动细胞计数仪 明场模式的 测定细胞活力 线性图证实了测量的活力与理论预期的活力(R2=0.9964) 紧接着，为了研究荧光模式下的细胞活力，将5个酵母样品用AO/PI 染色剂染色，并将10 μl样品加载到Photoslide载玻片中。在AO/PI染色后，拍摄并观察图像。 如下图所示，对5个不同活力的样品进行3次计数，测得的酵母细胞活力为R2=0.9979，与理论活力具有显著相关性。 使用LUNA-FX7 自动细胞计数仪 荧光模式下的 测定细胞活力 用吖啶橙/碘化丙啶染色并标记的酵母细胞 使用LUNA-FX7 自动细胞计数仪 荧光模式下的 测定细胞活力 线性图确认了测量的活力和理论上预期的活力(R2=0.9979) 2 LUNA-FX7自动细胞计数仪细胞浓度分析的线性情况 为了确定使用LUNA-FX7 自动细胞计数仪计数酵母时不同浓度的线性，制备了高浓度酵母，并通过连续稀释来测量浓度。 为了在明场模式下观察，用0.02%亚甲蓝染色，并分别在明场模式下的 和 中进行计数。 从图中可以看出，测得的R2值分别为0.998和0.9991。在荧光模式下也同样观察到这一点，当用AO/PI染色并在 模式下捕获时，R2值为0.9753。这意味着使用LUNA-FX7进行的酵母计数显示出从高浓度到低浓度的高线性度，且使用LUNA-FX7可以进行更准确的测定。 通过这些实验，我们可以思考酵母细胞定量的极限。酵母细胞平均大小为3~4 μm，典型的哺乳动物细胞大小为10 μm。因此，与2通道载玻片中哺乳动物细胞5.00e+4至1.50e+7 cells/ml的范围相比，酵母细胞可调整至5.00e+5至3.00e+7 cells/ml。 在LUNA-FX7 自动细胞计数仪的明场模式下测量酵母样品的浓度 总细胞计数 细胞计数和活力 在LUNA-FX7自动细胞计数仪荧光模式的 中测量酵母样品的浓度 3 LUNA-FX7自动细胞计数仪与血细胞计数器的比较 我们进行了一项实验来比较传统使用的血细胞计数器(Hemocytometer)和LUNA-FX7。 与之前的实验一样，样品用0.02%亚甲蓝和AO/PI染色，并各10 µl装载到血细胞计数器、LUNA细胞计数载玻片和 PhotonSlide载玻片上。在LUNA-FX7的明场和荧光模式两种模式下拍摄图像，并将浓度与血细胞计数器上测量的浓度进行比较。如图所示，血细胞计数器测量的值与LUNA-FX7测量的值没有观察到显著差异。 血细胞计数器和LUNA-FX自动细胞计数仪的酵母计数结果比较 结论 在此实验中，我们证明了LUNA-FX7可以准确可靠地对酵母细胞进行计数。此外，与传统的手动计数方法相比，使用LUNA-FX7计数酵母的速度快20倍、更可靠且不易出错。 04 点成生物细胞计数解决方案 作为全国知名的实验室仪器集成商，点成生物始终致力于为客户提供先进的实验室设备解决方案。 点成Aligned genetics为用户提供了先进的自动细胞计数仪设备，设备具有极高的精确度和可重复度，单次最多可检验8个样品，细胞计数浓度范围广，内置QC软件提供值得信任的数据，还符合21 CFR PART 11法规。 如果您对点成Aligned genetics自动细胞计数仪设备感兴趣，欢迎随时与我们联系。

展会邀请 2023第14届全国药品质量安全大会 China Drug Quality Safety 9月15-16日， 2023第14届全国药品质量安全大会 将在广州颐和国际会议中心举行，虹科诚邀您前来观展，届时我们将向您展示我们最新的 医药灭菌验证和冷链温度计及仓储温湿度监测解决方案 ，期待您莅临虹科 【A23】 展位，与我们的技术工程师们深入交流！更有主题演讲：《灭菌原理和灭菌工艺验证》，诚邀您的参与！ 9月15-16日 广州颐和国际会议中心 展位A23 点击链接，查看展品信息 现场演讲 虹科环境监测事业部 虹科环境监测事业部是行业领先的医药供应链环境监测和温度验证领域解决方案合作伙伴，与代表着世界顶尖水平、高端品质的瑞士ELPRO和丹麦ELLAB合作，为用户提供医药供应链各个环节的环境监测解决方案、温湿度记录仪、验证系统和校准系统，以及其他相关的服务。 作为专业的环境监测和温度验证解决方案提供商，我们将帮助您： 提高验证工作效率，降低成本，改进灭菌冻干等工艺，改善设计流程 提供专业的客户支持计划，包括技术支持、IQ/OQ服务、GxP服务、现场和工厂校准等 实现药品全生命周期的环境监测，数据信息的有效管理，保证药品运输和储存的合规性，为患者提供安全药物 一旦您开始应用虹科环境监测和温度验证解决方案，我们团队将以丰富的行业经验和法规知识，提供一系列专业服务和支持，以质量可靠，工作稳定的产品为您的验证及监测之旅保驾护航。

BEOnChip是西班牙的一家专注于微流控技术领域的公司，主要生产或定制微流控芯片。2021年7月，点成生物与BEOnChip正式达成战略合作协议，成为BEOnChip芯片的官方授权代理商。目前，BEOnChip开发4款标准微流控芯片：BE-GRANDIENT、BE-FLOW、BE-DOUBLEFLOW和BE-TRANSFLOW。本文总结了BEOnChip微流控芯片的六大突出优势，以便使用者更好地了解BEOnChip芯片。 1. 良好的生物相容性 BEOnChip芯片由COP(环烯烃聚合物)材质制成，该材料具有良好的生物相容性，可与活细胞、组织、器官相容，不会对细胞造成损伤，无毒性，且没有被免疫系统排斥的风险。 2. 出色的光学特性 COP具有出色的光学特性，在可见光和近紫外范围内具有高透明度、低双折射、高阿贝数，这种材料是应用于显微镜的理想选择。 3. 良好的耐化学性和耐热性 BEOnChip芯片具有出色的耐化学性，可抵抗酸甚至是极性溶剂，可采用湿法蚀刻等技术生产，易于使用酒精清洁和消毒。另外，该芯片的玻璃转化温度可高达180℃，有助于传感器集成与表面功能化。 4. 无非选择性吸附 与目前实验室与商业平台广泛使用的PDMS材料存在的非选择性吸附疏水性药物的缺点不同，COP具有无非选择性吸附的特性，这样的特性有助于药物准确输送和确保实验结果的准确性。 5. 易于使用 1）无气泡&易操作 BEOnChip芯片采用专利进气口设计，可以在管路中不产生气泡的情况下拧紧连接器，芯片独特的侧壁设计便于使用者在不接触仓的情况下进行操作。 2）与显微镜兼容 BEOnChip芯片尺寸大小与标准载玻片一致，观察位置与96孔板的位置匹配，此外，该芯片与任何类型的光学显微镜兼容，如明场、荧光、共聚焦显微镜等，便于使用者观察。 3）与微流控系统兼容 BEOnChip芯片与任何微流控系统兼容，使用者可以借助简单的连接套件将芯片与自己的微流控系统连接在一起使用。 6. 功能多样 1）细胞播种、包被、回收 使用者可以利用BEOnChip芯片进行2D、3D细胞培养或2D、3D细胞共培养，利用该芯片可以在体外建立一系列生理器官模型并进行后续研究，处理完成后的细胞也可以回收以进行下游分析。 2）互联互通 BEOnChip芯片间可相互连接。因此，利用芯片间的组合使用者可以轻松地创建复杂培养模型或者进行不同组织之间的串扰研究。 3）定制化 除了标准化芯片，BEOnChip芯片还提供定制化服务，客户可根据需要对细胞培养通道的容积、芯片基底、芯片隔膜孔径等进行定制。

一、前言 自2019年12月新型冠状病毒（SARA-CoV-2）爆发以来，全球经济和社会遭受了巨大损失。感染新冠病毒的患者可能无症状或表现出多种症状，包括 呼吸窘迫、凝血障碍、腹痛或腹泻甚至多器官系统性损伤。 此外，病毒目前已出现了多种变异体，对全球健康造成了更大的威胁。尽管目前已经开发了几种疫苗，但一些变异体对这些疫苗的敏感性降低， 因此，迫切需要全面了解新冠肺炎的发病机制，并开发更有效的疗法。 器官芯片是一种生物工程微流体细胞培养装置，通过对流体流动、机械信号和多细胞相互作用的精确控制模拟体内细胞微环境和器官的关键功能。 通常，器官芯片模型中的细胞来源包括细胞系、原代细胞和干细胞。 器官芯片常被用于研究病毒感染，如包含原代人体肝细胞的3D肝芯片被用来研究HBV感染。 与动物模型和传统细胞培养相比，器官芯片模型对人类病理生理学的研究更加精确直观，可以为病毒感染研究提供有价值的临床前平台。 本文主要介绍器官芯片用于新冠病毒的相关研究进展，为器官芯片应用在疾病建模、药物/疫苗开发、免疫反应、病毒传播、宿主病毒相互作用、个性化治疗等方面提供启示。 二、 器官芯片在病理生理学和宿主免疫反应研究的应用 为了研究发病机制并开发有效疗法，研究人员开发了多种器官芯片来探究人类对新冠病毒感染的生理和病理反应。 如利用肺芯片可以模拟天然新冠病毒的肺泡感染并评估抗病毒化合物的功效。 通过在流体流动下对肺泡上皮细胞、微血管内皮细胞和循环免疫细胞进行三重培养，这种肺芯片可以重建人类肺泡-毛细血管屏障的关键特征。在肺泡通道接种新冠病毒颗粒后，人肺上皮细胞对病毒感染的敏感性高于内皮细胞。 利用肺芯片研究SARS-CoV-2诱导的组织损伤和免疫反应 另外，肠道芯片也可以用于探索新冠肺炎引起的肠道反应。 流体流动或机械信号对细胞分化、功能和绒毛结构形成有重要影响，这在肠道中很关键。流动条件下模拟肠道病毒感染的芯片模型具备其他体外模型不能实现的优势。 如图展示了一种 人肠道新冠病毒感染芯片模型 ，该模型解释了新冠病毒诱导的肠道损伤和免疫反应。利用这个模型，研究者验证了肠上皮是病毒感染的潜在入口，并显示出病毒诱导的屏障损伤，包括破坏的肠绒毛结构和内皮连接。此外，有研究揭示了肠道菌群在新冠病毒感染中的潜在抗病毒能力和治疗价值，未来将肠道微生物与器官芯片结合将有助于研究它们在新冠病毒感染中的功能。 在流动条件下，通过在多层通道中共培养肠上皮细胞、内皮细胞和免疫细胞，构建了仿生人类肠道芯片 三、 器官芯片在药物评价与筛选中的应用 目前，药物测试在很大程度上依赖于动物模型和单层细胞培养，但它们往往不能准确地预测人类对药物的反应。 器官芯片可以作为疾病模型反映宿主细胞对病毒的反应，从而在快速筛选新药中发挥作用。 在被新冠病毒感染的肺芯片中，对瑞德西韦（remdesivir）的疗效进行了评估，结果表明其会抑制病毒复制和缓解肺泡屏障损坏。另一种感染新冠病毒的肺泡芯片表明，妥珠单抗（tocilizumab）通过减少炎症反应而不是抑制病毒复制来减缓屏障完整性的丧失。 此外，在感染新冠病毒的支气管芯片模型中，已批准药物（如阿莫地喹和托瑞米芬）可以作为潜在的病毒入侵抑制剂。人体器官芯片在筛选潜在药物上可以作为动物模型的可行替代品。 四、 总结与讨论 本文分享了 器官芯片在新型冠状病毒病理生理学及药物筛选评价中的相关研究进展。 新冠肺炎是一种全身性疾病，涉及新冠病毒感染和在肺、肝、脑、血管、肾和肠等多个器官中的增殖。 因此，我们需要开发更复杂的系统来探索不同器官和病毒之间的相互作用。多器官芯片可以以相互联系的方式概括器官-器官串扰并模拟对感染的全身反应，加速药物开发与精准医疗的进程。 满足病毒学研究需要的下一代人体器官模型示意图 未来，器官芯片还将与更多技术（如在线生物传感器、3D打印、基因编辑、多组学等）结合，来创建更复杂的器官模型，这些器官模型将揭示病原体传播的特征，并为系统反应分析、个性化医疗以及新药和疫苗开发提供新的机会。 参考文献：Wang Y, Wang P, Qin J. Human Organoids and Organs-on-Chips for Addressing COVID-19 Challenges. Adv Sci (Weinh). 2022 Apr;9(10):e2105187. doi: 10.1002/advs.202105187. 注：本文内容出自参考文献，仅供分享交流使用