标签: 细胞计数

一、概述 细胞尺寸在生物研究中至关重要。越来越多研究揭示了细胞大小和表型特征（如干性特征、增殖能力和代谢状态）之间复杂的相关性。在生物制造等应用的工艺流程中，细胞大小是评估细胞治疗中分批培养或原材料细胞是否健康的关键指标。因此，自动细胞计数中可靠的细胞大小测定已成为重要的结果。 点成LUNA-FX7细胞计数仪可精确提供细胞大小的数据。 除了所有点成LUNA系列细胞计数仪共有的标准细胞尺寸门控功能外，点成LUNA-FX7计数输出还包括与每个细胞活力状态结合的尺寸测定。此外，点成LUNA-FX7具有多种方法来根据计数期间和计数后的大小对细胞群进行分析和分类。在此，我们展示了点成LUNA-FX7在 测量细胞尺寸上的准确性和可靠性及其精确的尺寸门控功能 。为了评估确定细胞大小的准确性，在明场总细胞计数模式下对六种不同的NIST可追踪粒度标准品和两种细胞系AsPC-1(胰腺癌)和DLD-1(结肠癌)进行了计数。 二、实验过程 1、 精确测量各种粒径 六种不同的NIST可追踪粒径标准品(10-46 μm)在点成LUNA-FX7的明场总细胞计数模式下进行计数。测定粒径的准确度为96.7%以上。相反，市面上大多细胞计数仪对于10 μm或更小和50 μm及更大的颗粒则不准确。 NIST可追踪粒度标准的尺寸测定。 (A-F)图像显示了标记良好的颗粒，表明颗粒直径尺寸的精确测量。 (G)该表显示了LUNA-FX7™和竞争对手计数器的测量颗粒尺寸和尺寸测量精度。 2、混合条件下目标尺寸颗粒的计数 为了评估点成LUNA-FX7中尺寸测量的精确性，我们准备了四种不同比例的NIST可追踪粒径标准品（~10 μm、20 μm、40 μm和60 μm）的混合物。最初，我们对最小细胞尺寸值为3 μm和最大细胞尺寸值为60 μm的混合颗粒进行计数，该值是根据默认协议进行修改的。计数后，生成细胞浓度与细胞大小的直方图，并且NIST标准已正确分类。 精确的尺寸测定。 (A) 图像显示了标记良好的各种尺寸的颗粒。 (B-C)直方图指示NIST颗粒按尺寸的准确分布。 执行选定的尺寸门控，生成适合目标尺寸的完美标签，尺寸测量的准确度超过96.2%。此外，尺寸门控可以轻松应用于点成LUNA-FX7，通过计数前预设的协议，通过计数后立即调整直方图，或利用具有不同大小参数的协议重新分析存储的计数数据。 LUNA-FX7™中特定尺寸的门控。 标记的图像和直方图显示，目标尺寸的颗粒（以橙色表示）通过门控进行了集中、选择性和排他性的检测。 3、细胞系的计数和尺寸门控应用 最后，我们计数了两种不同大小范围的细胞系：AsPC-1（胰腺癌）和DLD-1（结肠癌）。健康的AsPC-1 细胞的尺寸范围为8 - 40 µm，而健康的DLD-1细胞的尺寸范围预计较窄，为10 - 20 µm。LUNA-FX7™ 准确捕获两个种群的整个大小范围。 AsPC-1和DLD-1细胞的细胞计数和大小测定。 应用AsPC-1 (A-C)和DLD-1 (D-F)细胞系来确认不同尺寸混合的计数性能。 4、结论 点成LUNA-FX7™有多种方法来测量、区分和确定细胞群的大小。点成LUNA-FX7™具有计数期间和计数后预定义大小门控选项，可灵活评估细胞群的健康状况和质量。此外， 点成LUNA-FX7™的再分析功能 可以对下游分析中保存的珍贵计数进行更广泛的评估。 三、点成生物细胞计数解决方案 作为全国知名的实验室仪器集成商，点成生物始终致力于为客户提供先进的实验室设备解决方案。点成Aligned genetics为用户提供了先进的自动细胞计数仪设备，设备具有极高的精确度和可重复度。如果您对点成Aligned genetics自动细胞计数仪设备感兴趣，欢迎随时与我们联系。

来源：点成生物科技 点成案例 | 使用自动细胞计数仪进行酵母细胞计数 原文链接：https://mp.weixin.qq.com/s/ySQNPftdrVO9cyH8mS78vw 欢迎关注虹科，为您提供最新资讯！ 01 概述 酵母可用于基础研究、酿造和蒸馏以及食品生产等多种应用，这些应用的全过程都离不开准确的细胞计数和活力测定。事实证明，较小的尺寸和形态对于自动细胞计数仪来说是相当具有挑战性的，利用活体染色剂手动计数酵母的方法繁琐且容易出错。在这篇文章中，我们分享了如何利用LUNA FX7自动细胞计数仪准确可靠地对酵母细胞进行计数。 02 实验方法 1 将酵母菌株EC1118接种到YPD肉汤中，30℃、200 rpm培养过夜 2，将酵母按照1：3至1：5的比例稀释在1XPBS中 3 稀释的培养物被稀释成2个相等的样品，然后将一份样品热灭活（65℃，20分钟）以生成“活细胞和死细胞”，用于活力测试 4 使用酵母细胞缓冲液Ⅱ按细胞：缓冲液=1：5和1：10的比例进一步稀释细胞 5 活力测试：如表混合活细胞和死细胞 03 实验结果 1 LUNA-FX7自动细胞计数仪计测的细胞活力线性情况 为了确定细胞活力的线性情况，使用活细胞和死细胞制备各种活力的样品，然后使用LUNA-FX7自动细胞计数仪进行计数。使用LUNA-FX7，可以在荧光模式下检查活力，也可以用明场模式的 检查。 为了在明场模式下测定细胞活力，将酵母样品与相同体积的0.02%亚甲蓝染色剂混合，并将10 μl样品加载到LUNA细胞计数载玻片上。酵母样品制备为死细胞(0%)、25%、50%、75%、活细胞(100%)。 使用LUNA-FX7 自动细胞计数仪 明场模式的 测定细胞活力 用亚甲蓝染色并标记的酵母细胞 如图所示，将5个样品用0.02%的亚甲蓝染色并在明场模式的 中进行图像观察与拍摄。重复计数3次，计算平均活力，并据此确认细胞活力的线性情况。在LUNA FX7明场模式 测得的活力R2=0.9964，与理论活力高度吻合。 使用LUNA-FX7 自动细胞计数仪 明场模式的 测定细胞活力 线性图证实了测量的活力与理论预期的活力(R2=0.9964) 紧接着，为了研究荧光模式下的细胞活力，将5个酵母样品用AO/PI 染色剂染色，并将10 μl样品加载到Photoslide载玻片中。在AO/PI染色后，拍摄并观察图像。 如下图所示，对5个不同活力的样品进行3次计数，测得的酵母细胞活力为R2=0.9979，与理论活力具有显著相关性。 使用LUNA-FX7 自动细胞计数仪 荧光模式下的 测定细胞活力 用吖啶橙/碘化丙啶染色并标记的酵母细胞 使用LUNA-FX7 自动细胞计数仪 荧光模式下的 测定细胞活力 线性图确认了测量的活力和理论上预期的活力(R2=0.9979) 2 LUNA-FX7自动细胞计数仪细胞浓度分析的线性情况 为了确定使用LUNA-FX7 自动细胞计数仪计数酵母时不同浓度的线性，制备了高浓度酵母，并通过连续稀释来测量浓度。 为了在明场模式下观察，用0.02%亚甲蓝染色，并分别在明场模式下的 和 中进行计数。 从图中可以看出，测得的R2值分别为0.998和0.9991。在荧光模式下也同样观察到这一点，当用AO/PI染色并在 模式下捕获时，R2值为0.9753。这意味着使用LUNA-FX7进行的酵母计数显示出从高浓度到低浓度的高线性度，且使用LUNA-FX7可以进行更准确的测定。 通过这些实验，我们可以思考酵母细胞定量的极限。酵母细胞平均大小为3~4 μm，典型的哺乳动物细胞大小为10 μm。因此，与2通道载玻片中哺乳动物细胞5.00e+4至1.50e+7 cells/ml的范围相比，酵母细胞可调整至5.00e+5至3.00e+7 cells/ml。 在LUNA-FX7 自动细胞计数仪的明场模式下测量酵母样品的浓度 总细胞计数 细胞计数和活力 在LUNA-FX7自动细胞计数仪荧光模式的 中测量酵母样品的浓度 3 LUNA-FX7自动细胞计数仪与血细胞计数器的比较 我们进行了一项实验来比较传统使用的血细胞计数器(Hemocytometer)和LUNA-FX7。 与之前的实验一样，样品用0.02%亚甲蓝和AO/PI染色，并各10 µl装载到血细胞计数器、LUNA细胞计数载玻片和 PhotonSlide载玻片上。在LUNA-FX7的明场和荧光模式两种模式下拍摄图像，并将浓度与血细胞计数器上测量的浓度进行比较。如图所示，血细胞计数器测量的值与LUNA-FX7测量的值没有观察到显著差异。 血细胞计数器和LUNA-FX自动细胞计数仪的酵母计数结果比较 结论 在此实验中，我们证明了LUNA-FX7可以准确可靠地对酵母细胞进行计数。此外，与传统的手动计数方法相比，使用LUNA-FX7计数酵母的速度快20倍、更可靠且不易出错。 04 点成生物细胞计数解决方案 作为全国知名的实验室仪器集成商，点成生物始终致力于为客户提供先进的实验室设备解决方案。 点成Aligned genetics为用户提供了先进的自动细胞计数仪设备，设备具有极高的精确度和可重复度，单次最多可检验8个样品，细胞计数浓度范围广，内置QC软件提供值得信任的数据，还符合21 CFR PART 11法规。 如果您对点成Aligned genetics自动细胞计数仪设备感兴趣，欢迎随时与我们联系。